寡核苷酸 Tm 计算器
计算 DNA 寡核苷酸或 PCR 引物的解链温度。主要结果使用最近邻法（SantaLucia 1998）并结合盐浓度校正；同时显示基本的 Wallace 规则和 GC% 估算值以供比较。
输入 DNA 序列（仅限 A、C、G、T）以计算其 Tm。
使用方法
解链温度（Tm）是 DNA 双链有一半解离为单链时的温度。对寡核苷酸最准确的估算方法是最近邻热力学：每个相邻碱基对台阶都贡献已知的焓（ΔH）和熵（ΔS），Tm 由 Tm = ΔH / (ΔS + R·ln(C_T/4)) 得出，并需结合盐浓度进行校正。本计算器使用统一的 SantaLucia 1998 参数。
一价阳离子浓度（Na⁺）和寡核苷酸链浓度都会影响 Tm，因此请输入你反应体系的实际数值。为便于快速核查，Wallace 规则——每个 A/T 贡献 2 °C，每个 G/C 贡献 4 °C——适用于短寡核苷酸，对于较长序列则显示基于 GC% 的公式估算值。序列必须只包含 A、C、G 和 T（U 按 T 处理）。
示例
- GTAAAACGACGGCCAGT（M13 正向引物）在 50 mM Na⁺ 下的解链温度约为 50 °C。
- Wallace 规则：对于含 8 个 A/T 和 9 个 G/C 的 17 聚体，Tm = 2×8 + 4×9 = 52 °C。
- 提高盐浓度或寡核苷酸浓度会使 Tm 升高。
常见问题
- 哪种方法最准确？
- 最近邻法对寡核苷酸最为准确，因为它考虑了相邻碱基的具体身份，而不仅仅是整体 GC 含量。这是本工具给出的主要结果。
- 为什么盐浓度和寡核苷酸浓度很重要？
- 阳离子会稳定 DNA 双链，从而提高 Tm；较高的链浓度会使平衡向双链方向移动。两者都出现在最近邻方程中，因此输入你反应体系的实际数值可得到更真实的 Tm。
- 什么时候 Wallace 规则就足够了？
- 对于长度小于约 14 个碱基的寡核苷酸，Wallace 规则（每个 A/T 2 °C，每个 G/C 4 °C）是一个合理的快速估算方法，但它忽略了盐浓度、浓度和序列背景，因此对较长引物的偏差会增大。
- 是否支持 RNA 或简并碱基？
- 尿嘧啶按胸腺嘧啶处理，但最近邻参数是针对 DNA 的。不支持 IUPAC 简并码——序列必须为 A、C、G 和 T（或 U）。