Calculadora de Master Mix de PCR
Escale uma master mix de PCR para qualquer número de reações. Defina os volumes por reação, o número de reações e um excedente para perdas de pipetagem, e obtenha o total de cada reagente.
| Componente | Por reação (µL) | Total (µL) |
|---|---|---|
| 10X reaction buffer | 27,5 µL | |
| dNTP mix (10 mM) | 5,5 µL | |
| Forward primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Reverse primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Taq polymerase | 1,38 µL |
Alíquote 4,13 µL de master mix por tubo e depois adicione o molde.
Como funciona
Uma master mix de PCR agrupa todos os reagentes partilhados entre as reações — tampão, dNTP, primers e polimerase — num único tubo, para que sejam pipetados uma vez e distribuídos em alíquotas iguais. Esta calculadora multiplica cada volume por reação pelo número de reações, mais uma percentagem de excedente para cobrir as pequenas perdas de pipetagem.
Um excedente típico é de 5–10%: preparar mistura para algumas reações extra garante que o último tubo ainda recebe um volume completo e correto. O ADN molde é adicionado a cada tubo separadamente (não à master mix), pelo que o volume de master mix por tubo apresentado é o que se dispensa antes de adicionar a amostra.
Exemplos
- Para 10 reações com 10% de excedente, cada reagente é escalado ×11.
- O molde é adicionado por tubo, não à master mix partilhada.
- O excedente cobre as perdas de pipetagem para que o último tubo fique completo.
Perguntas frequentes
- O que é uma master mix de PCR?
- Um único tubo pré-misturado com todos os reagentes comuns às reações, distribuído em partes iguais para que cada tubo seja idêntico e se pipete menos vezes.
- Porquê adicionar excedente?
- A pipetagem perde um pouco de volume em cada transferência. Preparar 5–10% a mais garante que as últimas reações ainda recebem uma quantidade completa e correta.
- O molde está na master mix?
- Não — o ADN molde difere entre amostras, pelo que é adicionado a cada tubo separadamente, após a distribuição da master mix partilhada.
- Posso alterar os volumes?
- Sim. Edite qualquer volume por reação na tabela para corresponder ao seu protocolo; os totais atualizam-se automaticamente.