Calculadora de OD260 para Concentração
Converta uma leitura de espetrofotómetro a 260 nm em concentração de ácido nucleico. Introduza a absorvância e o fator de diluição, escolha o tipo de ácido nucleico e, opcionalmente, adicione a leitura de A280 para obter o rácio de pureza.
- ng/µL
- 50
- A260/A280
- —
Como funciona
Os ácidos nucleicos absorvem luz ultravioleta a 260 nm, e a absorvância é proporcional à concentração. Uma unidade de absorvância (A260 = 1, percurso de 1 cm) corresponde a cerca de 50 µg/mL de ADN de cadeia dupla, 33 µg/mL de ADN de cadeia simples, ou 40 µg/mL de ARN de cadeia simples. A concentração é, portanto, A260 × fator de diluição × o fator do tipo, e como 1 µg/mL equivale a 1 ng/µL, as duas unidades partilham o mesmo número.
Introduza a absorvância medida e o fator de diluição usado, e escolha o tipo de ácido nucleico. Se também tiver lido a absorvância a 280 nm, introduzi-la dá o rácio de pureza A260/A280 — aproximadamente 1,8 para ADN puro e 2,0 para ARN puro, com valores mais baixos a indicar contaminação por proteína ou fenol.
Exemplos
- A260 de 1,0 para dsADN (diluição 1) = 50 µg/mL.
- A260 de 0,5 diluído 100× para ARN = 0,5 × 100 × 40 = 2000 µg/mL.
- Um A260/A280 de cerca de 1,8 indica ADN puro.
Perguntas frequentes
- Como é que A260 dá a concentração?
- Os ácidos nucleicos absorvem a 260 nm proporcionalmente à concentração. Multiplicar a absorvância pelo fator de diluição e por um fator específico do tipo (50, 33 ou 40 µg/mL por OD) dá a concentração.
- Porque são os fatores 50, 33 e 40?
- São as quantidades estabelecidas empiricamente de ADN de cadeia dupla, ADN de cadeia simples e ARN de cadeia simples que produzem uma absorvância de 1 a 260 nm num percurso ótico de 1 cm.
- O que é o rácio A260/A280?
- É um indicador de pureza. O ADN puro tem um rácio próximo de 1,8 e o ARN puro próximo de 2,0; um rácio marcadamente mais baixo sugere contaminação por proteína ou fenol.
- µg/mL é o mesmo que ng/µL?
- Sim, numericamente. Um micrograma por mililitro equivale a um nanograma por microlitro, pelo que o valor da concentração é o mesmo em ambas as unidades.