Calculadora de Transferência de Método de HPLC
Transfira um método de HPLC entre colunas de tamanhos diferentes mantendo a separação equivalente. Introduza ambas as geometrias de coluna e o método original para obter o caudal, o volume de injeção e o tempo de gradiente escalados.
- Novo volume de injeção
- 1,39 µL
- Novo tempo de gradiente
- 5,2 min
Como funciona
Transferir um método de HPLC para uma coluna de tamanho diferente — por exemplo, para uma coluna mais estreita, mais curta e sub-2-µm, para poupar solvente e tempo — exige escalar o método para que a cromatografia se mantenha equivalente. Esta calculadora ajusta três aspetos de forma geométrica. O caudal escala com a secção transversal da coluna (diâmetro interno ao quadrado) e inversamente com o tamanho da partícula, para manter constante a velocidade linear. O volume de injeção escala com o volume da coluna (diâmetro² × comprimento). O tempo de gradiente (ou de corrida) escala com o volume da coluna dividido pela alteração do caudal.
Introduza as dimensões da coluna original e da coluna alvo, mais o caudal, injeção e tempo de gradiente atuais, e são calculados os valores equivalentes para a nova coluna. Verifique experimentalmente as separações críticas após a transferência.
Exemplos
- Passar de 4,6×150 mm, 5 µm → 2,1×50 mm, 2,6 µm reduz o caudal e os volumes.
- O caudal escala com o diâmetro² e inversamente com o tamanho da partícula.
- O volume de injeção escala com o volume da coluna.
Perguntas frequentes
- Porquê escalar um método entre colunas?
- Para manter a separação equivalente. Uma coluna mais pequena precisa de caudal, injeção e tempo de gradiente proporcionalmente menores para reproduzir a cromatografia original.
- Como escala o caudal?
- Com o quadrado da razão entre diâmetros internos, e inversamente com o tamanho da partícula, para que a velocidade linear através do enchimento se mantenha constante.
- Como escalam o volume de injeção e o gradiente?
- O volume de injeção escala com o volume da coluna (diâmetro² × comprimento); o tempo de gradiente escala com o volume da coluna dividido pela alteração do caudal.
- A transferência é exata?
- É um ponto de partida geométrico. Diferenças no volume morto do sistema e efeitos extra-coluna significam que deve verificar experimentalmente as separações críticas.