Calculadora de Master Mix de PCR
Dimensione um master mix de PCR para qualquer número de reações. Defina os volumes por reação, o número de reações e um excedente para perdas de pipetagem, e obtenha o total de cada reagente.
| Componente | Por reação (µL) | Total (µL) |
|---|---|---|
| 10X reaction buffer | 27,5 µL | |
| dNTP mix (10 mM) | 5,5 µL | |
| Forward primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Reverse primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Taq polymerase | 1,38 µL |
Distribua 4,13 µL de master mix por tubo e depois adicione o molde.
Como funciona
Um master mix de PCR reúne em um único tubo todos os reagentes compartilhados entre as reações — tampão, dNTPs, primers e polimerase —, para que você pipete uma única vez e distribua quantidades iguais. Esta calculadora multiplica cada volume por reação pelo número de reações, mais uma porcentagem de excedente para cobrir as pequenas perdas de pipetagem.
Um excedente típico é de 5–10%: preparar mistura para algumas reações extras garante que o último tubo ainda receba um volume completo e preciso. O DNA molde é adicionado a cada tubo separadamente (não no master mix), então o volume de master mix por tubo exibido é o que você deve dispensar antes de adicionar sua amostra.
Exemplos
- Para 10 reações com 10% de excedente, cada reagente é multiplicado por 11.
- O molde é adicionado por tubo, não ao master mix compartilhado.
- O excedente cobre a perda de pipetagem para que o último tubo fique cheio.
Perguntas frequentes
- O que é um master mix de PCR?
- Um único tubo pré-misturado com todos os reagentes comuns às suas reações, distribuído em partes iguais para que cada tubo seja idêntico e você pipete menos vezes.
- Por que adicionar excedente?
- A pipetagem perde um pouco de volume a cada transferência. Preparar 5–10% a mais garante que as últimas reações ainda recebam uma quantidade completa e precisa.
- O molde está no master mix?
- Não — o DNA molde varia entre amostras, então é adicionado a cada tubo separadamente, depois de distribuído o master mix compartilhado.
- Posso alterar os volumes?
- Sim. Edite qualquer volume por reação na tabela para corresponder ao seu protocolo; os totais são atualizados automaticamente.