Calculadora de OD260 para Concentração
Converta uma leitura de espectrofotômetro a 260 nm em concentração de ácido nucleico. Informe a absorbância e o fator de diluição, escolha o tipo de ácido nucleico e, opcionalmente, adicione a leitura de A280 para obter a razão de pureza.
- ng/µL
- 50
- A260/A280
- —
Como funciona
Ácidos nucleicos absorvem luz ultravioleta a 260 nm, e a absorbância é proporcional à concentração. Uma unidade de absorbância (A260 = 1, caminho óptico de 1 cm) corresponde a cerca de 50 µg/mL de DNA de fita dupla, 33 µg/mL de DNA de fita simples, ou 40 µg/mL de RNA de fita simples. A concentração é, portanto, A260 × fator de diluição × o fator do tipo, e como 1 µg/mL é igual a 1 ng/µL, as duas unidades compartilham o mesmo número.
Informe a absorbância medida e o fator de diluição usado, e escolha o tipo de ácido nucleico. Se você também leu a absorbância a 280 nm, informá-la fornece a razão de pureza A260/A280 — aproximadamente 1,8 para DNA puro e 2,0 para RNA puro, com valores mais baixos indicando contaminação por proteína ou fenol.
Exemplos
- A260 de 1,0 para dsDNA (diluição 1) = 50 µg/mL.
- A260 de 0,5 diluído 100× para RNA = 0,5 × 100 × 40 = 2000 µg/mL.
- A260/A280 de aproximadamente 1,8 indica DNA puro.
Perguntas frequentes
- Como o A260 fornece a concentração?
- Ácidos nucleicos absorvem a 260 nm proporcionalmente à concentração. Multiplicar a absorbância pelo fator de diluição e por um fator específico do tipo (50, 33 ou 40 µg/mL por OD) fornece a concentração.
- Por que os fatores são 50, 33 e 40?
- São as quantidades estabelecidas empiricamente de DNA de fita dupla, DNA de fita simples e RNA de fita simples que produzem uma absorbância de 1 a 260 nm em um caminho óptico de 1 cm.
- O que é a razão A260/A280?
- É um indicador de pureza. DNA puro tem razão próxima de 1,8 e RNA puro próxima de 2,0; uma razão marcadamente mais baixa sugere contaminação por proteína ou fenol.
- µg/mL é o mesmo que ng/µL?
- Sim, numericamente. Um micrograma por mililitro equivale a um nanograma por microlitro, então o valor da concentração é o mesmo em ambas as unidades.