Calculadora de Transferência de Método de HPLC
Transfira um método de HPLC entre colunas de tamanhos diferentes mantendo a separação equivalente. Informe as duas geometrias de coluna e seu método original para obter o fluxo, o volume de injeção e o tempo de gradiente dimensionados.
- Novo volume de injeção
- 1,39 µL
- Novo tempo de gradiente
- 5,2 min
Como funciona
Transferir um método de HPLC para uma coluna de tamanho diferente — por exemplo, para uma coluna mais estreita, mais curta e sub-2-µm, para economizar solvente e tempo — exige dimensionar o método para que a cromatografia permaneça equivalente. Esta calculadora ajusta três variáveis geometricamente. A vazão escala com a seção transversal da coluna (diâmetro interno ao quadrado) e inversamente com o tamanho de partícula, para manter a velocidade linear constante. O volume de injeção escala com o volume da coluna (diâmetro² × comprimento). O tempo de gradiente (ou de corrida) escala com o volume da coluna dividido pela variação de vazão.
Informe as dimensões da coluna original e da coluna alvo, além do fluxo, injeção e tempo de gradiente atuais, e os valores equivalentes para a nova coluna são calculados. Verifique separações críticas experimentalmente após a transferência.
Exemplos
- Migrar de 4,6×150 mm, 5 µm → 2,1×50 mm, 2,6 µm reduz o fluxo e os volumes.
- O fluxo escala com o diâmetro² e inversamente com o tamanho de partícula.
- O volume de injeção escala com o volume da coluna.
Perguntas frequentes
- Por que dimensionar um método entre colunas?
- Para manter a separação equivalente. Uma coluna menor precisa proporcionalmente de menos fluxo, injeção e tempo de gradiente para reproduzir a cromatografia original.
- Como a vazão é dimensionada?
- Com a razão dos diâmetros internos ao quadrado, e inversamente com o tamanho de partícula, para que a velocidade linear pelo recheio permaneça constante.
- Como o volume de injeção e o gradiente são dimensionados?
- O volume de injeção escala com o volume da coluna (diâmetro² × comprimento); o tempo de gradiente escala com o volume da coluna dividido pela variação de vazão.
- A transferência é exata?
- É um ponto de partida geométrico. Diferenças no volume morto do sistema e efeitos extracoluna significam que você deve verificar separações críticas experimentalmente.