PCR-mastermixcalculator
Schaal een PCR-mastermix naar elk aantal reacties. Stel uw volumes per reactie, het aantal reacties en een overmaat voor pipetteerverlies in om het totaal van elk reagens te berekenen.
| Component | Per reactie (µL) | Totaal (µL) |
|---|---|---|
| 10X reaction buffer | 27,5 µL | |
| dNTP mix (10 mM) | 5,5 µL | |
| Forward primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Reverse primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Taq polymerase | 1,38 µL |
Verdeel 4,13 µL mastermix per buisje en voeg vervolgens template toe.
Hoe het werkt
Een PCR-mastermix bundelt elk reagens dat gedeeld wordt tussen uw reacties — buffer, dNTP's, primers en polymerase — in één buisje, zodat u het één keer pipetteert en gelijke hoeveelheden verdeelt. Deze calculator vermenigvuldigt elk volume per reactie met het aantal reacties, plus een overmaatpercentage om de kleine verliezen door pipetteren te compenseren.
Een typische overmaat is 5–10%: door mix voor een paar extra reacties klaar te maken, krijgt ook het laatste buisje nog een volledig, nauwkeurig volume. Template-DNA wordt apart aan elk buisje toegevoegd (niet aan de mastermix), dus het getoonde mastermixvolume per buisje is wat u afgeeft voordat u uw monster toevoegt.
Voorbeelden
- Voor 10 reacties met 10% overmaat wordt elk reagens ×11 geschaald.
- Template wordt per buisje toegevoegd, niet aan de gedeelde mastermix.
- Overmaat compenseert pipetteerverlies zodat het laatste buisje nog vol is.
Veelgestelde vragen
- Wat is een PCR-mastermix?
- Eén vooraf gemengd buisje met alle reagentia die alle reacties gemeen hebben, gelijkmatig verdeeld zodat elk buisje identiek is en u minder vaak hoeft te pipetteren.
- Waarom overmaat toevoegen?
- Bij elke overdracht gaat door pipetteren een beetje volume verloren. Door 5–10% extra klaar te maken, krijgen de laatste reacties nog steeds een volledige, nauwkeurige hoeveelheid.
- Zit template in de mastermix?
- Nee — template-DNA verschilt per monster en wordt daarom apart aan elk buisje toegevoegd nadat de gedeelde mastermix is afgegeven.
- Kan ik de volumes wijzigen?
- Ja. Wijzig elk volume per reactie in de tabel om aan uw protocol te voldoen; de totalen worden automatisch bijgewerkt.