OD260-naar-concentratiecalculator
Zet een spectrofotometermeting bij 260 nm om naar nucleïnezuurconcentratie. Vul de absorptie en verdunningsfactor in, kies het nucleïnezuurtype, en voeg optioneel de A280-meting toe om de zuiverheidsratio te krijgen.
- ng/µL
- 50
- A260/A280
- —
Hoe het werkt
Nucleïnezuren absorberen ultraviolet licht bij 260 nm, en de absorptie is evenredig met de concentratie. Eén absorptie-eenheid (A260 = 1, weglengte 1 cm) komt overeen met ongeveer 50 µg/mL dubbelstrengs DNA, 33 µg/mL enkelstrengs DNA, of 40 µg/mL enkelstrengs RNA. De concentratie is dus A260 × verdunningsfactor × de typefactor, en omdat 1 µg/mL gelijk is aan 1 ng/µL delen de twee eenheden hetzelfde getal.
Vul de gemeten absorptie en de gebruikte verdunningsfactor in, en kies het nucleïnezuurtype. Als je ook de absorptie bij 280 nm hebt gemeten, geeft het invullen ervan de A260/A280-zuiverheidsratio — ongeveer 1,8 voor zuiver DNA en 2,0 voor zuiver RNA, waarbij lagere waarden op eiwit- of fenolcontaminatie wijzen.
Voorbeelden
- A260 van 1,0 voor dsDNA (verdunning 1) = 50 µg/mL.
- A260 van 0,5 verdund 100× voor RNA = 0,5 × 100 × 40 = 2000 µg/mL.
- Een A260/A280 van ongeveer 1,8 duidt op zuiver DNA.
Veelgestelde vragen
- Hoe geeft A260 de concentratie?
- Nucleïnezuren absorberen bij 260 nm evenredig met de concentratie. Het vermenigvuldigen van de absorptie met de verdunningsfactor en een typespecifieke factor (50, 33 of 40 µg/mL per OD) geeft de concentratie.
- Waarom zijn de factoren 50, 33 en 40?
- Dit zijn de empirisch vastgestelde hoeveelheden dubbelstrengs DNA, enkelstrengs DNA en enkelstrengs RNA die een absorptie van 1 geven bij 260 nm bij een weglengte van 1 cm.
- Wat is de A260/A280-ratio?
- Het is een zuiverheidsindicator. Zuiver DNA heeft een ratio rond 1,8 en zuiver RNA rond 2,0; een duidelijk lagere ratio wijst op contaminatie door eiwit of fenol.
- Is µg/mL hetzelfde als ng/µL?
- Ja, numeriek. Eén microgram per milliliter is gelijk aan één nanogram per microliter, dus de concentratiewaarde is in beide eenheden hetzelfde.