HPLC-methodetransfercalculator
Zet een HPLC-methode over tussen kolommen van verschillende afmetingen met behoud van een gelijkwaardige scheiding. Voer beide kolomgeometrieën en uw oorspronkelijke methode in om de geschaalde flow, het injectievolume en de gradiënttijd te berekenen.
- Nieuw injectievolume
- 1,39 µL
- Nieuwe gradiënttijd
- 5,2 min
Hoe het werkt
Het overzetten van een HPLC-methode naar een kolom met een andere afmeting — bijvoorbeeld naar een smallere, kortere kolom met deeltjes kleiner dan 2 µm om oplosmiddel en tijd te besparen — vereist het schalen van de methode zodat de chromatografie gelijkwaardig blijft. Deze calculator past drie zaken geometrisch aan. De flowsnelheid schaalt met de doorsnede van de kolom (inwendige diameter in het kwadraat) en omgekeerd evenredig met de deeltjesgrootte, om de lineaire snelheid constant te houden. Het injectievolume schaalt met het kolomvolume (diameter² × lengte). De gradiënt- (of loop-)tijd schaalt met het kolomvolume gedeeld door de verandering in flowsnelheid.
Voer de oorspronkelijke en nieuwe kolomafmetingen in, plus uw huidige flow, injectie en gradiënttijd, en de gelijkwaardige waarden voor de nieuwe kolom worden berekend. Verifieer kritieke scheidingen na de overzetting experimenteel.
Voorbeelden
- Overzetten van 4,6×150 mm, 5 µm → 2,1×50 mm, 2,6 µm verlaagt de flow en volumes.
- Flow schaalt met diameter² en omgekeerd met de deeltjesgrootte.
- Injectievolume schaalt met het kolomvolume.
Veelgestelde vragen
- Waarom een methode tussen kolommen schalen?
- Om de scheiding gelijkwaardig te houden. Een kleinere kolom heeft evenredig minder flow, injectie en gradiënttijd nodig om de oorspronkelijke chromatografie te reproduceren.
- Hoe schaalt de flowsnelheid?
- Met de verhouding van de inwendige diameters in het kwadraat, en omgekeerd evenredig met de deeltjesgrootte, zodat de lineaire snelheid door de pakking constant blijft.
- Hoe schalen injectievolume en gradiënt?
- Injectievolume schaalt met het kolomvolume (diameter² × lengte); gradiënttijd schaalt met het kolomvolume gedeeld door de verandering in flowsnelheid.
- Is de transfer exact?
- Het is een geometrisch uitgangspunt. Verschillen in systeem-dwellvolume en extrakolomeffecten betekenen dat u kritieke scheidingen experimenteel moet verifiëren.