Calcolatore master mix PCR
Scala un master mix PCR per qualsiasi numero di reazioni. Imposta i volumi per reazione, il numero di reazioni e un margine per le perdite di pipettaggio per ottenere il totale di ogni reagente.
| Componente | Per reazione (µL) | Totale (µL) |
|---|---|---|
| 10X reaction buffer | 27,5 µL | |
| dNTP mix (10 mM) | 5,5 µL | |
| Forward primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Reverse primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Taq polymerase | 1,38 µL |
Aliquota 4,13 µL di master mix per provetta, quindi aggiungi il template.
Come funziona
Un master mix PCR raggruppa tutti i reagenti condivisi tra le reazioni — buffer, dNTP, primer e polimerasi — in un'unica provetta, così da pipettarli una sola volta e distribuire quantità uguali. Questo calcolatore moltiplica ogni volume per reazione per il numero di reazioni, più una percentuale di margine per coprire le piccole perdite dovute al pipettaggio.
Un margine tipico è del 5–10%: preparare la miscela per qualche reazione in più garantisce che anche l'ultima provetta riceva un volume completo e accurato. Il DNA template va aggiunto separatamente a ogni provetta (non nel master mix), quindi il volume di master mix per provetta mostrato è quello da distribuire prima di aggiungere il campione.
Esempi
- Per 10 reazioni con margine del 10%, ogni reagente è scalato ×11.
- Il template va aggiunto per provetta, non nel master mix condiviso.
- Il margine copre le perdite di pipettaggio così l'ultima provetta resta piena.
Domande frequenti
- Cos'è un master mix PCR?
- Un'unica provetta premiscelata con tutti i reagenti comuni alle reazioni, distribuita in parti uguali così ogni provetta è identica e si pipetta meno volte.
- Perché aggiungere un margine?
- Il pipettaggio comporta una piccola perdita di volume a ogni trasferimento. Preparare il 5–10% in più garantisce che le reazioni finali ricevano comunque una quantità completa e accurata.
- Il template è nel master mix?
- No — il DNA template varia per campione, quindi va aggiunto separatamente a ogni provetta dopo aver distribuito il master mix condiviso.
- Posso modificare i volumi?
- Sì. Modifica qualsiasi volume per reazione nella tabella per adattarlo al tuo protocollo; i totali si aggiornano automaticamente.