Calcolatore da OD260 a concentrazione
Converte una lettura dello spettrofotometro a 260 nm in concentrazione di acido nucleico. Inserisci l'assorbanza e il fattore di diluizione, scegli il tipo di acido nucleico, e opzionalmente aggiungi la lettura A280 per ottenere il rapporto di purezza.
- ng/µL
- 50
- A260/A280
- —
Come funziona
Gli acidi nucleici assorbono la luce ultravioletta a 260 nm, e l'assorbanza è proporzionale alla concentrazione. Un'unità di assorbanza (A260 = 1, cammino ottico 1 cm) corrisponde a circa 50 µg/mL di DNA a doppio filamento, 33 µg/mL di DNA a singolo filamento, o 40 µg/mL di RNA a singolo filamento. La concentrazione è quindi A260 × fattore di diluizione × il fattore di tipo, e poiché 1 µg/mL equivale a 1 ng/µL le due unità condividono lo stesso numero.
Inserisci l'assorbanza misurata e il fattore di diluizione usato, e scegli il tipo di acido nucleico. Se hai anche letto l'assorbanza a 280 nm, inserirla dà il rapporto di purezza A260/A280 — circa 1,8 per DNA puro e 2,0 per RNA puro, con valori più bassi che indicano contaminazione da proteine o fenolo.
Esempi
- A260 di 1,0 per dsDNA (diluizione 1) = 50 µg/mL.
- A260 di 0,5 diluito 100× per RNA = 0,5 × 100 × 40 = 2000 µg/mL.
- A260/A280 di circa 1,8 indica DNA puro.
Domande frequenti
- Come dà l'A260 la concentrazione?
- Gli acidi nucleici assorbono a 260 nm in proporzione alla concentrazione. Moltiplicare l'assorbanza per il fattore di diluizione e un fattore specifico del tipo (50, 33 o 40 µg/mL per OD) dà la concentrazione.
- Perché i fattori sono 50, 33 e 40?
- Sono le quantità stabilite empiricamente di DNA a doppio filamento, DNA a singolo filamento e RNA a singolo filamento che danno un'assorbanza di 1 a 260 nm con un cammino ottico di 1 cm.
- Cos'è il rapporto A260/A280?
- È un indicatore di purezza. Il DNA puro ha un rapporto vicino a 1,8 e l'RNA puro vicino a 2,0; un rapporto notevolmente più basso suggerisce contaminazione da proteine o fenolo.
- µg/mL è uguale a ng/µL?
- Sì, numericamente. Un microgrammo per millilitro equivale a un nanogrammo per microlitro, quindi il valore di concentrazione è lo stesso in entrambe le unità.