Calcolatore trasferimento metodo HPLC
Trasferisci un metodo HPLC tra colonne di dimensioni diverse mantenendo la separazione equivalente. Inserisci entrambe le geometrie di colonna e il tuo metodo originale per ottenere il flusso, il volume di iniezione e il tempo di gradiente scalati.
- Nuovo volume di iniezione
- 1,39 µL
- Nuovo tempo di gradiente
- 5,2 min
Come funziona
Trasferire un metodo HPLC a una colonna di dimensioni diverse — ad esempio a una colonna più stretta, più corta e sub-2-µm per risparmiare solvente e tempo — richiede di scalare il metodo così che la cromatografia resti equivalente. Questo calcolatore adegua tre parametri geometricamente. La portata scala con la sezione trasversale della colonna (diametro interno al quadrato) e in modo inverso con la dimensione delle particelle per mantenere costante la velocità lineare. Il volume di iniezione scala con il volume della colonna (diametro² × lunghezza). Il tempo di gradiente (o di corsa) scala con il volume della colonna diviso per la variazione di portata.
Inserisci le dimensioni della colonna originale e di quella target insieme al flusso, all'iniezione e al tempo di gradiente attuali, e vengono calcolati i valori equivalenti per la nuova colonna. Verifica sperimentalmente le separazioni critiche dopo il trasferimento.
Esempi
- Passando da 4,6×150 mm, 5 µm a 2,1×50 mm, 2,6 µm si riducono flusso e volumi.
- Il flusso scala con il diametro² e in modo inverso con la dimensione delle particelle.
- Il volume di iniezione scala con il volume della colonna.
Domande frequenti
- Perché scalare un metodo tra colonne?
- Per mantenere la separazione equivalente. Una colonna più piccola richiede flusso, iniezione e tempo di gradiente proporzionalmente minori per riprodurre la cromatografia originale.
- Come scala la portata?
- Con il rapporto dei diametri interni al quadrato, e in modo inverso con la dimensione delle particelle, così la velocità lineare attraverso il riempimento resta costante.
- Come scalano volume di iniezione e gradiente?
- Il volume di iniezione scala con il volume della colonna (diametro² × lunghezza); il tempo di gradiente scala con il volume della colonna diviso per la variazione di portata.
- Il trasferimento è esatto?
- È un punto di partenza geometrico. Differenze nel volume di ritardo del sistema ed effetti extra-colonna richiedono di verificare sperimentalmente le separazioni critiche.