Calculateur de mix maître PCR
Adaptez un mix maître PCR à n'importe quel nombre de réactions. Définissez vos volumes par réaction, le nombre de réactions et une marge pour les pertes de pipetage afin d'obtenir le total de chaque réactif.
| Composant | Par réaction (µL) | Total (µL) |
|---|---|---|
| 10X reaction buffer | 27,5 µL | |
| dNTP mix (10 mM) | 5,5 µL | |
| Forward primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Reverse primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Taq polymerase | 1,38 µL |
Répartissez 4,13 µL de mix maître par tube, puis ajoutez la matrice.
Comment ça marche
Un mix maître PCR regroupe tous les réactifs communs à vos réactions — tampon, dNTP, amorces et polymérase — dans un seul tube, afin de le pipeter une seule fois et de répartir des quantités égales. Ce calculateur multiplie chaque volume par réaction par le nombre de réactions, plus un pourcentage de marge pour couvrir les petites pertes de pipetage.
Une marge typique est de 5 à 10 % : préparer le mix pour quelques réactions supplémentaires garantit que le dernier tube reçoit encore un volume complet et précis. La matrice d'ADN est ajoutée séparément à chaque tube (pas dans le mix maître), donc le volume de mix maître par tube affiché est ce que vous distribuez avant d'ajouter votre échantillon.
Exemples
- Pour 10 réactions avec 10 % de marge, chaque réactif est multiplié ×11.
- La matrice est ajoutée par tube, pas dans le mix maître partagé.
- La marge couvre les pertes de pipetage pour que le dernier tube reste plein.
Questions fréquentes
- Qu'est-ce qu'un mix maître PCR ?
- Un tube unique prémélangé contenant tous les réactifs communs à vos réactions, réparti en quantités égales pour que chaque tube soit identique et que vous pipetiez moins souvent.
- Pourquoi ajouter une marge ?
- Chaque transfert de pipetage entraîne une légère perte de volume. Préparer 5 à 10 % en plus garantit que les dernières réactions reçoivent encore une quantité complète et précise.
- La matrice est-elle dans le mix maître ?
- Non — l'ADN matrice diffère selon l'échantillon, il est donc ajouté séparément à chaque tube après distribution du mix maître partagé.
- Puis-je modifier les volumes ?
- Oui. Modifiez n'importe quel volume par réaction dans le tableau pour correspondre à votre protocole ; les totaux se mettent à jour automatiquement.