Calculateur de transfert de méthode HPLC
Transférez une méthode HPLC entre colonnes de tailles différentes tout en conservant une séparation équivalente. Entrez les deux géométries de colonne et votre méthode d'origine pour obtenir le débit, le volume d'injection et le temps de gradient adaptés.
- Nouveau volume d'injection
- 1,39 µL
- Nouveau temps de gradient
- 5,2 min
Comment ça marche
Transférer une méthode HPLC vers une colonne de taille différente — par exemple vers une colonne plus étroite, plus courte et sub-2-µm pour économiser solvant et temps — nécessite d'adapter la méthode pour que la chromatographie reste équivalente. Ce calculateur ajuste trois paramètres géométriquement. Le débit s'adapte au carré du diamètre interne (section de la colonne) et inversement à la taille des particules pour garder une vitesse linéaire constante. Le volume d'injection s'adapte au volume de la colonne (diamètre² × longueur). Le temps de gradient (ou de run) s'adapte au volume de la colonne divisé par le changement de débit.
Entrez les dimensions de colonne d'origine et cible ainsi que votre débit, injection et temps de gradient actuels, et les valeurs équivalentes pour la nouvelle colonne sont calculées. Vérifiez expérimentalement les séparations critiques après le transfert.
Exemples
- Passer de 4,6×150 mm, 5 µm → 2,1×50 mm, 2,6 µm réduit le débit et les volumes.
- Le débit s'adapte au carré du diamètre et inversement à la taille des particules.
- Le volume d'injection s'adapte au volume de la colonne.
Questions fréquentes
- Pourquoi adapter une méthode entre colonnes ?
- Pour conserver une séparation équivalente. Une colonne plus petite nécessite proportionnellement moins de débit, d'injection et de temps de gradient pour reproduire la chromatographie d'origine.
- Comment le débit s'adapte-t-il ?
- Selon le rapport des diamètres internes au carré, et inversement à la taille des particules, afin que la vitesse linéaire à travers le remplissage reste constante.
- Comment le volume d'injection et le gradient s'adaptent-ils ?
- Le volume d'injection s'adapte au volume de la colonne (diamètre² × longueur) ; le temps de gradient s'adapte au volume de la colonne divisé par le changement de débit.
- Le transfert est-il exact ?
- C'est un point de départ géométrique. Les différences de volume mort du système et les effets extra-colonnes signifient que vous devez vérifier expérimentalement les séparations critiques.