PCR-Mastermix-Rechner
Skalieren Sie einen PCR-Mastermix auf beliebig viele Reaktionen. Geben Sie die Volumina pro Reaktion, die Reaktionsanzahl und einen Überschuss für Pipettierverluste ein, um das Gesamtvolumen jedes Reagenzes zu erhalten.
| Komponente | Pro Reaktion (µL) | Gesamt (µL) |
|---|---|---|
| 10X reaction buffer | 27,5 µL | |
| dNTP mix (10 mM) | 5,5 µL | |
| Forward primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Reverse primer (10 µM) | 5,5 µL | |
| Taq polymerase | 1,38 µL |
Aliquotieren Sie 4,13 µL Mastermix pro Röhrchen und geben Sie dann die Template-DNA hinzu.
So funktioniert es
Ein PCR-Mastermix fasst alle in Ihren Reaktionen gemeinsam verwendeten Reagenzien — Puffer, dNTPs, Primer und Polymerase — in einem Röhrchen zusammen, sodass Sie nur einmal pipettieren und gleiche Mengen aliquotieren. Dieser Rechner multipliziert jedes Volumen pro Reaktion mit der Reaktionsanzahl zuzüglich eines Überschussprozentsatzes zum Ausgleich kleiner Pipettierverluste.
Ein typischer Überschuss liegt bei 5–10 %: Wird Mix für ein paar zusätzliche Reaktionen angesetzt, erhält auch das letzte Röhrchen noch ein volles, genaues Volumen. Die Template-DNA wird jedem Röhrchen separat zugegeben (nicht in den Mastermix), das angezeigte Mastermix-Volumen pro Röhrchen ist also die Menge, die Sie vor Zugabe der Probe dispensieren.
Beispiele
- Bei 10 Reaktionen mit 10 % Überschuss wird jedes Reagenz um den Faktor 11 skaliert.
- Die Template-DNA wird pro Röhrchen zugegeben, nicht in den gemeinsamen Mastermix.
- Der Überschuss gleicht Pipettierverluste aus, damit auch das letzte Röhrchen voll ist.
Häufig gestellte Fragen
- Was ist ein PCR-Mastermix?
- Ein einzelnes vorgemischtes Röhrchen aller in Ihren Reaktionen gemeinsamen Reagenzien, das zu gleichen Teilen aliquotiert wird, sodass jedes Röhrchen identisch ist und Sie seltener pipettieren müssen.
- Warum einen Überschuss einplanen?
- Beim Pipettieren geht bei jedem Transfer etwas Volumen verloren. Ein Ansatz von 5–10 % mehr stellt sicher, dass auch die letzten Reaktionen noch eine volle, genaue Menge erhalten.
- Ist die Template-DNA im Mastermix enthalten?
- Nein — die Template-DNA unterscheidet sich je Probe und wird deshalb nach dem Dispensieren des gemeinsamen Mastermixes separat in jedes Röhrchen gegeben.
- Kann ich die Volumina ändern?
- Ja. Bearbeiten Sie jedes Volumen pro Reaktion in der Tabelle passend zu Ihrem Protokoll; die Gesamtwerte aktualisieren sich automatisch.