OD260-zu-Konzentration-Rechner
Wandeln Sie eine Spektralphotometer-Messung bei 260 nm in eine Nukleinsäurekonzentration um. Geben Sie die Absorption und den Verdünnungsfaktor ein, wählen Sie den Nukleinsäuretyp und fügen Sie optional die A280-Messung hinzu, um das Reinheitsverhältnis zu erhalten.
- ng/µL
- 50
- A260/A280
- —
So funktioniert es
Nukleinsäuren absorbieren ultraviolettes Licht bei 260 nm, und die Absorption ist proportional zur Konzentration. Eine Absorptionseinheit (A260 = 1, 1 cm Weglänge) entspricht etwa 50 µg/mL doppelsträngiger DNA, 33 µg/mL einzelsträngiger DNA oder 40 µg/mL einzelsträngiger RNA. Die Konzentration ist daher A260 × Verdünnungsfaktor × der Typfaktor, und da 1 µg/mL gleich 1 ng/µL ist, teilen sich die beiden Einheiten dieselbe Zahl.
Geben Sie die gemessene Absorption und den verwendeten Verdünnungsfaktor ein und wählen Sie den Nukleinsäuretyp. Wenn Sie auch die Absorption bei 280 nm gemessen haben, ergibt deren Eingabe das A260/A280-Reinheitsverhältnis — etwa 1,8 für reine DNA und 2,0 für reine RNA, wobei niedrigere Werte auf Protein- oder Phenolkontamination hinweisen.
Beispiele
- A260 von 1,0 für dsDNA (Verdünnung 1) = 50 µg/mL.
- A260 von 0,5, 100-fach verdünnt für RNA = 0,5 × 100 × 40 = 2000 µg/mL.
- Ein A260/A280 von etwa 1,8 deutet auf reine DNA hin.
Häufig gestellte Fragen
- Wie ergibt A260 die Konzentration?
- Nukleinsäuren absorbieren bei 260 nm proportional zur Konzentration. Die Multiplikation der Absorption mit dem Verdünnungsfaktor und einem typspezifischen Faktor (50, 33 oder 40 µg/mL pro OD) ergibt die Konzentration.
- Warum sind die Faktoren 50, 33 und 40?
- Es sind die empirisch ermittelten Mengen an doppelsträngiger DNA, einzelsträngiger DNA und einzelsträngiger RNA, die bei einer Weglänge von 1 cm eine Absorption von 1 bei 260 nm ergeben.
- Was ist das A260/A280-Verhältnis?
- Es ist ein Reinheitsindikator. Reine DNA hat ein Verhältnis von etwa 1,8 und reine RNA von etwa 2,0; ein deutlich niedrigeres Verhältnis deutet auf eine Kontamination durch Protein oder Phenol hin.
- Ist µg/mL dasselbe wie ng/µL?
- Ja, zahlenmäßig. Ein Mikrogramm pro Milliliter entspricht einem Nanogramm pro Mikroliter, sodass der Konzentrationswert in beiden Einheiten gleich ist.