HPLC-Methodentransfer-Rechner
Übertragen Sie eine HPLC-Methode zwischen unterschiedlich dimensionierten Säulen bei gleichwertiger Trennung. Geben Sie beide Säulengeometrien und Ihre ursprüngliche Methode ein, um skalierten Fluss, Injektionsvolumen und Gradientenzeit zu erhalten.
- Neues Injektionsvolumen
- 1,39 µL
- Neue Gradientenzeit
- 5,2 min
So funktioniert es
Der Wechsel einer HPLC-Methode auf eine anders dimensionierte Säule — etwa auf eine schmalere, kürzere Sub-2-µm-Säule zur Einsparung von Lösungsmittel und Zeit — erfordert eine Skalierung der Methode, damit die Chromatographie gleichwertig bleibt. Dieser Rechner passt drei Größen geometrisch an. Die Flussrate skaliert mit dem Säulenquerschnitt (Innendurchmesser im Quadrat) und umgekehrt proportional zur Partikelgröße, damit die lineare Geschwindigkeit konstant bleibt. Das Injektionsvolumen skaliert mit dem Säulenvolumen (Durchmesser² × Länge). Die Gradienten- (bzw. Lauf-)zeit skaliert mit dem Säulenvolumen geteilt durch die Änderung der Flussrate.
Geben Sie die ursprünglichen und die Zielsäulenabmessungen sowie Ihren aktuellen Fluss, Ihre Injektion und Gradientenzeit ein, um die entsprechenden Werte für die neue Säule zu berechnen. Überprüfen Sie kritische Trennungen nach dem Transfer experimentell.
Beispiele
- Der Wechsel von 4,6×150 mm, 5 µm zu 2,1×50 mm, 2,6 µm senkt Fluss und Volumina.
- Der Fluss skaliert mit dem Durchmesser² und umgekehrt mit der Partikelgröße.
- Das Injektionsvolumen skaliert mit dem Säulenvolumen.
Häufig gestellte Fragen
- Warum eine Methode zwischen Säulen skalieren?
- Um die Trennung gleichwertig zu halten. Eine kleinere Säule benötigt proportional weniger Fluss, Injektion und Gradientenzeit, um die ursprüngliche Chromatographie zu reproduzieren.
- Wie skaliert die Flussrate?
- Mit dem Verhältnis der Innendurchmesser im Quadrat und umgekehrt proportional zur Partikelgröße, damit die lineare Geschwindigkeit durch das Packungsmaterial konstant bleibt.
- Wie skalieren Injektionsvolumen und Gradient?
- Das Injektionsvolumen skaliert mit dem Säulenvolumen (Durchmesser² × Länge); die Gradientenzeit skaliert mit dem Säulenvolumen geteilt durch die Änderung der Flussrate.
- Ist der Transfer exakt?
- Er ist ein geometrischer Ausgangspunkt. Unterschiede im Totvolumen des Systems und extrakolumnäre Effekte bedeuten, dass Sie kritische Trennungen experimentell überprüfen sollten.